炮制工艺对远志化学成分的影响

　　目的对2种远志炮制工艺进行分析、比较，考察不同炮制工艺对远志化学成分的影响。方法按照《中国药典》方法和传统经验法炮制远志，采用高效液相色谱法测定2种不同工艺有效成分细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ和3，6′二芥子酰基蔗糖的含量，并进行比较。结果传统经验法炮制远志中的化学成分细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ和3，6′二芥子酰基蔗糖的含量均符合《中国药典》规定，且传统经验法炮制工艺操作简单易行。结论此炮制方法简单可行，为甘草制远志的炮制应用提供依据。

　　关键词：远志;炮制;细叶远志皂苷;远志酮Ⅲ;3，6′二芥子酰基蔗糖

　　远志是临床常用药，为远志科植物远志(PolygalatenuifoliaWilld.)或卵叶远志(PolygalasibiriaL.)的干燥根[1]。有安神益智、交通心肾功能[2]。临床上常常用于失眠多梦、健忘惊悸等症状。传统认为远志甘草水制后有减毒增效作用[3]，生远志可以引起口舌麻木、腹胀、呕吐等不良反应，而用甘草水制远志可以消除以上不良反应。所以临床上应用远志常需炮制后入药，而且目前全国各地炮制方法与历代本草中的记载不尽相同[4]。《中国药典》2015年版中的远志炮制品有生远志和制远志两种规格。在《全国中药炮制规范》中[5]除了有生远志和制远志，还载有蜜远志、朱远志等不同炮制品。本实验中传统经验法制远志，来自于明代古籍《景岳全书》[6]，原文为“制以甘草汤，浸一宿晒干，炒用”，此法清代也有论述，现按《中国药典》的炮制方法和传统经验炮制方法进行比较，考察不同炮制工艺对远志化学成分的影响[7]。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器Waterse2695型高效液相色谱仪[美国Waters科技(上海)有限公司]，AG135型电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，L400型台式离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司)，UPW-N30UV型超纯水仪(上海仪电科学仪器股份有限公司)，SK-3300LH型超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)。1.2试剂细叶远志皂苷(中国食品药品检定研究院，批号111849-201303，纯度95.3%)、远志酮Ⅲ(中国科学院成都生物研究所，批号MUST-17032306，纯度99.40%)及3，6′二芥子酰基蔗糖(中国科学院成都生物研究所，批号MUST-17070608，纯度99.06%)，磷酸(天津市盛奥化学试剂有限公司，批号20150412)为分析纯，甲醇(天津市北联精细化学品开发有限公司，批号20170816)、乙腈(美国Fisher公司，批号20150527)均为色谱纯，洗药、煎药用水为饮用水。1.3药材实验所用生远志(批号：180301、180501、180601)及甘草(批号：180501)2018年6月购于新疆玖元堂中药饮片有限责任公司，其中远志5kg、甘草1kg均经新疆医科大学附属中医医院李永和主任中药师鉴定，实验用远志为远志科植物远志(PolygalatenuifoliaWilld.)的干燥根，甘草为豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根和根茎。

　　2方法与结果

　　2.1炮制方法2.1.1《中国药典》法取甘草，加适量水煎汤，去渣，加入净远志，用文火煮至汤吸尽，取出，干燥。每100千克远志用甘草6kg。2.1.2传统经验炮制方法取甘草，加适量水煎汤，去渣备用，另取净远志，加入适量的甘草水拌匀，润透至汤液吸尽，置炒锅中，用文火炒干至颜色加深，表面有焦斑时取出，摊晾放凉。每100千克远志用甘草6kg。2.1.3甘草水的制备[8]取甘草饮片，加入30倍量水浸泡30min后，煎煮30min，滤过，再次加入30倍量水煎煮30min，滤过，合并滤液，浓缩至净远志的3倍量(药典法制远志)或浓缩至净远志的0.5倍量(传统经验法制远志)，备用。2.2细叶远志皂苷含量测定2.2.1色谱条件[9-10]ShimadzuVP-ODS色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液(70∶30)，检测波长为210nm，柱温为30℃，流速1.0mL/min，进样量为10μL。理论板数按细叶远志皂苷峰计算应不低于3000。根据以上条件，分离效果良好。2.2.2对照品溶液的制备精密称取细叶远志皂苷对照品(批号111849-201303，纯度95.3%)适量，然后精密称定，再加入甲醇，制成每1毫升含有1.037mg细叶远志皂苷的溶液，制备即得。2.2.3供试品溶液的制备精密称取实验用生远志和制远志粉末9个样品(全部过三号筛)各1g，放入具塞锥形瓶中，然后精密加入70%甲醇溶液50mL，称定其重量，超声处理1h，放冷以后，称定其重量，再用70%甲醇溶液补足损失的重量，摇匀后滤过，再精密量取滤液25mL，置于圆底烧瓶中蒸干，残渣再加入50mL浓度为10%氢氧化钠溶液，加热回流2h，冷却以后用浓盐酸调节pH值为4～5，每次加入水饱和正丁醇50mL并且不断振摇，连续提取3次，合并正丁醇溶液，蒸干，所得残渣加甲醇适量溶解，移至25mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，供试品溶液制备完成。2.2.4线性关系考察精密吸取细叶远志皂苷对照品溶液，用甲醇稀释配制成浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mg/mL的标准溶液。分别进样3次，各进样10μL，进行测定。所得细叶远志皂苷的峰面积为纵坐标Y，其浓度为横坐标X，得回归方程是：Y=2.306×107X-1.297×106(系数r=0.9997)。从试验结果可以看出，细叶远志皂苷对照品溶液的峰面积与浓度(0.1～1mg/mL)有较好的线性关系。2.2.5精密度试验精密吸取10μL已制备的对照品溶液，按照以上色谱条件进样5次进行测定，计算所得峰面积的RSD值为0.7%。试验结果表明，仪器精密度良好。2.2.6稳定性试验精密吸取10μL同一批次制远志样品溶液，按照以上色谱条件，在0、4、8、12和24h时进样并进行测定，计算所得RSD值为1.2%。试验结果显示，样品溶液在24h内稳定。2.2.7重复性试验取同一批次制远志样品粉末5份各1g，按照供试品溶液的制备方法制备，每份溶液精密吸取10μL进样，测定细叶远志皂苷的含量，计算得RSD值为1.3%。结果表明，本试验方法重现性很好。2.2.8加样回收率试验取已知含量(编号为6)的制远志样品粉末6份，精密称定各1g，分别加入等量的细叶远志皂苷对照品溶液，按照供试品溶液的制备方法制得，从制备的每份溶液中精密吸取10μL进样并按照以上色谱条件进行测定，计算结果得：细叶远志皂苷的平均回收率为98.93%，RSD值为1.7%。见表1。2.2.9样品含量测定根据以上实验条件，生远志经过甘草水炮制后，远志中有效成分细叶远志皂苷含量明显升高，传统经验法炮制远志中的化学成分细叶远志皂苷含量符合《中国药典》规定，见表2、图1、图2。2.3远志酮Ⅲ及3，6′二芥子酰基蔗糖的含量测定2.3.1色谱条件[11]ShimadzuVP-ODS色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)，检测波长为320nm，柱温为30℃，流速1.0mL/min，进样量为5μL。理论板数按3，6′二芥子酰基蔗糖峰计算应不低于3000。根据以上条件，分离效果良好。2.3.2对照品储备液的制备分别称取远志酮Ⅲ对照品(批号MUST-17032306，纯度，99.40%)和3，6′二芥子酰基蔗糖(批号MUST-17070608，纯度99.06%)对照品适量，分别精密称定其重量，再分别加入甲醇，制成每1毫升含有0.1654mg远志酮Ⅲ溶液和每1毫升含2.0mg3，6′二芥子酰基蔗糖的溶液，制备即得。2.3.3供试品溶液的制备精密称取实验用生远志和制远志粉末9个样品(全部过三号筛)各1g，放入具塞锥形瓶中，然后精密加入浓度为70%的甲醇溶液25mL，称定其重量，加热回流1.5h，冷却后，再称定其重量，然后用浓度为70%的甲醇溶液补足损失的重量，摇匀后滤过，取滤液，供试品溶液制备完成。2.3.4线性关系考察精密量取远志酮Ⅲ和3，6′二芥子酰基蔗糖对照品溶液各1.0、2.5、5.0、7.5、10.0mL，移入10mL量瓶中，用浓度为70%的甲醇溶液定容，摇匀备用。以上溶液分别进样3次，各进样5μL，进行测定。所得远志酮Ⅲ和3，6′二芥子酰基蔗糖的峰面积为纵坐标Y，其浓度为横坐标X，得远志酮Ⅲ的回归方程为Y=8.16×105X-97.624，r=0.9999;3，6′二芥子酰基蔗糖的回归方程为Y=1.519×106X-160.554，r=0.9999。试验结果表明，远志酮Ⅲ对照品溶液的浓度在0.01654～0.1654mg/mL范围内线性关系良好;3，6’二芥子酰基蔗糖对照品溶液的浓度在0.2～2.0mg/mL范围内线性关系良好。2.3.5精密度试验精密吸取“2.3.2”下已制备的远志酮Ⅲ对照品储备液和3，6′二芥子酰基蔗糖对照品储备液各5μL，按照“2.2.1”下色谱条件进样5次进行测定，计算所得远志酮Ⅲ的RSD值为1.2%;3，6′二芥子酰基蔗糖的RSD值为1.1%。结果显示，试验仪器精密度良好。2.3.6稳定性试验精密吸取5μL同一批次制远志样品溶液，按照“2.3.1”色谱条件，在0、4、8、12和24h时进样并进行测定，计算远志酮Ⅲ的RSD值为1.4%、3，6′二芥子酰基蔗糖的RSD值为1.1%。结果显示，样品溶液在24h内稳定。2.3.7重复性试验取同一批次制远志样品粉末5份各1g，按照“2.3.3”下方法制备成供试溶液，每份溶液精密吸取5μL进样，测定远志酮Ⅲ和3，6′二芥子酰基蔗糖的含量，计算得远志酮Ⅲ的RSD值为1.2%，3，6′二芥子酰基蔗糖的RSD值为1.3%。结果显示，本试验方法重现性很好。2.3.8加样回收率试验取已知含量(编号为5)的制远志样品粉末6份，精密称定各1g，分别加入等量的对照品溶液，按照供试品溶液的制备方法制得，从制备的每份溶液中精密吸取5μL进样并按照“2.3.1”色谱条件进行测定，计算结果得：远志酮Ⅲ的平均回收率为98.92%，RSD值为2.0%，3，6′二芥子酰基蔗糖的平均回收率为99.20%，RSD值为1.2%。见表3、4。2.3.9样品含量测定根据以上实验条件，生远志经过甘草水炮制后，远志中有效成分远志酮Ⅲ和3，6′-二芥子酰基蔗糖的含量均明显升高，传统经验法炮制远志中的化学成分远志酮Ⅲ和3，6′-二芥子酰基蔗糖含量符合药典规定，见表5、6和图3、4。

　　3讨论

　　本试验通过多个指标来衡量两种炮制工艺[12]，采用HPLC法测定并对比两种不同工艺炮制的远志饮片有效成分，本研究结果显示，生远志经过甘草水炮制后，远志中有效成分细叶远志皂苷[13]、远志酮Ⅲ和3，6′-二芥子酰基蔗糖的含量均明显升高，传统经验法炮制远志中的化学成分细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ和3，6′二芥子酰基蔗糖的含量均符合药典规定，确定传统炮制工艺可行，为远志的炮制工艺提供了参考。国内外文献报道[14-15]多以生远志和制远志为主，主要研究远志的药理和成分分析，远志加工炮制工艺的报道比较少，而临床上以蜜炙远志和甘草制远志应用最多，本试验通过甘草制远志的实际生产和传统经验炮制方法进行研究，总结出自己的经验，确定传统方法炮制远志的工艺流程为：取甘草，加适量水煎汤，去渣备用，另取净远志，加入适量的甘草水拌匀，润透至汤液吸尽，置炒锅中，用文火炒干至颜色加深，表面有焦斑时取出，摊晾放凉。远志每100千克，用甘草6kg，此方法为远志的临床用药奠定了基础。课题组从实际出发并咨询我院中药专家和老药工，改良了药典法制远志的不足之处并对甘草制远志的历史沿革进行了系统整理，总结以往的炮制经验和临床体会，在对比了两种炮制工艺和质量标准的基础上，对甘草制远志的炮制工艺机理进行了初步探究并总结了宝贵经验。本课题经验法制远志大大缩短了炮制时间，节省了大量人力物力，课题组下一步继续对两种工艺制远志的炮制时间、炮制程度等进行对比，为工业批量生产提供技术支持，为制远志合理、安全、有效的临床应用提供科学依据。

　　作者：李鸿飞 刘飞 刘兆龙 单位：新疆医科大学附属中医医院

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