编辑部征稿研制冻干小鼠的神经生长因子(2)

　　表1 小鼠鼠龄和体质量对NGF产量与活性的影响　略

　　图1 略

　　2.4 鉴别试验与等电点 将2.5S NGF SDS-PAGE带转移到NC膜上，与NGF抗体进行结合反应，经免疫显色，NC膜上相应于2.5S NGF带处出现1条棕色带(Fig2);等电聚焦电泳出现3条带，其pI值分别为8.7，9.0和9.2(Fig3).

　　图2 略

　　2.5 生物活性及比活性 采用中国药品生物制品检定所提供的2.5S NGF参比品为标准，经校正，我们实验中提取的各批样品生物活性一般大于5×107 BU・L-1 .根据计算，比活性不低于5×108 BU・g-1 蛋白.

　　图3 略

　　2.6 赋形剂和保护剂的选择 采用60g・L-1 甘露醇做赋形剂和保护剂，冻干后成形、色泽均良好，但其生物活性损失很大;使用20g・L-1 白蛋白，冻干后活性无损失，各种理化指标均符合标准，但成形稍差，结构略显疏松.

　　3 讨论

　　NGF主要来源于唾液腺如颌下腺、前列腺、蛇毒及脑内胆碱能神经元支配区，其中以成年雄性小鼠颌下腺含量最高.小鼠颌下腺NGF是7S NGF的高分子物，含有α，β，γ3个亚单位，具有生物活性的是同源β二聚体，每个单体含118个氨基酸，Mr 约13500，等电点约9.2.研究结果[10，11] 显示人鼠间NGF基因编码的β亚单位氨基酸序列同源性高达89%，且哺乳动物NGF受体具有高度的保守性，表明不同物种间的NGF具有相同的生物学功能.因此我们选择成年雄性小鼠为研究对象，建立了从其颌下腺分离纯化βNGF的制备工艺及相应的质量检定标准.

　　βNGF肽链常发生两种修饰，一种发生在N端，水解失去含8个氨基酸残基的肽段，另一种发生在C端，水解失去一个精氨酸残基.这就衍生出NGF的多种形式，它们彼此之间存在着等电点、分子质量的微小差异.因沉降系数约为2.5，故被统称为2.5S NGF.因为上述修饰不涉及活性中心部位重要的氨基酸残基，所以各种形式仍具有βNGF的全部活 性[12，13] .我们纯化的2.5S NGF在等电聚焦电泳中出现3条带，即为βNGF的不同修饰形式，其结果与文献[2]报道一致.在研制过程中，我们发现鼠龄和体质量对NGF的产量有较大的影响，鼠龄越大，NGF产量越高，生物活性也随之升高.这是由于NGF的产生是由雄激素刺激NGF在颌下腺粒曲导管细胞表达的结果，所以动物来源应是60d龄以上的成年雄性小鼠，未成熟鼠和雌鼠不宜选用.另外，我们观察了两种不同的赋形剂对冻干样品外观及生物活性的影响，NGF做为一种多肽类生物活性物质，在体外极易失活，20g・L-1 白蛋白对NGF活性的保护优于60g・L-1 甘露醇.

　　致 谢 本工作得到生物化学与分子生物学教研室王国华高级实验师、药立波教授等的大力支持与帮助.

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